Мрља по Граму: како се прави и за шта служи

Садржај

• Како се врши мрља по Граму
• За шта је то

Грамова мрља или једноставно Грам је брза и једноставна техника која има за циљ разликовање бактерија према карактеристикама њиховог ћелијског зида након излагања различитим бојама и растворима.

Дакле, помоћу бојења по Граму могуће је поред облика бактерија проверити и боју коју добијају, а овај резултат је важан за дефинисање других стратегија за идентификовање бактеријских врста и за то да лекар укаже на превентивни третман према микроскопски посматраним карактеристикама.

Бојење грама се обично обавља рутински у лабораторији и део је прегледа за бактериоскопију. Разумети шта је бактериоскопија и како се то ради.

Како се врши мрља по Граму

Мрља по Граму је брза, практична и јефтина метода за идентификовање бактерија одговорних за инфекције, а корисна је за лекаре да укажу на превентивни третман инфекције која се може догодити, јер су познате специфичне карактеристике ових група бактерија,

Бојење по Граму врши се у 7 главних корака, међутим протокол се може разликовати у зависности од лабораторије:

1. Ставите неколико колонија бактерије на тобоган, додајући кап воде како бисте олакшали хомогенизацију колонија;
2. Пустите да се мало осуши и оштрица може брзо проћи кроз пламен да би фаворизовала сушење, међутим важно је обратити пажњу на температуру, јер ако је температура превисока могуће је да дође до промене у структури бактерије, које могу ометати резултат испитивања;
3. Када се клизач осуши, покријте га бојом кристалног љубичастог и пустите да делује око 1 минут;
4. Опрати стакалце млазом текуце воде и покрити га луголом, који има за циљ фиксирање плаве боје, и пустити да делује 1 минут. Обе врсте бактерија могу да апсорбују комплекс који чине боја и лугол, постајући плави;
5. Затим оперите тобоган текућом водом и нанесите 95% алкохола, остављајући да делује 30 секунди. Алкохол је одговоран за растварање липидне мембране која ствара грам негативне бактерије и, на тај начин, уклањање комплекса насталог између боје и лугола, обезбојење ових бактерија. Међутим, у случају грам-позитивних бактерија, алкохол дехидрира ћелијски зид грам-позитивних бактерија, због чега се поре скупљају и чине их непропусним;
6. Затим поново оперите у текућој води и покријте тобоган другом бојом, фуксином или сафранином и пустите да делује 30 секунди;
7. Затим оперите тобоган под текућом водом и оставите да се осуши на собној температури.

Чим се стакалце осуши, могуће је ставити кап потапајућег уља и посматрати предметно стакло под микроскопом са објективом од 100к, при чему је могуће проверити присуство или одсуство бактерија, као и присуство квасца и епителија ћелије.

За шта је то

Главни циљ бојења по Граму је разликовање бактерија према карактеристикама ћелијског зида и општој морфологији. Према томе, према карактеристикама уоченим под микроскопом, бактерије се могу класификовати на:

• Грам-позитивне бактерије, који се визуализују плавом бојом због чињенице да их алкохол не боји, јер имају дебљи ћелијски зид и поре им се стежу када су изложени луголу;
• Грам-негативне бактерије, који се визуализују ружичастом / љубичастом бојом због чињенице да су обојени алкохолом и обојени сафранином или фуксином.

Након гледања бактерија под микроскопом, могуће је да се у лабораторији спроведу даљи тестови како би се идентификовале врсте бактерија. Међутим, путем Грама и повезаности са знаковима и симптомима које особа представља, лекар може да укаже на превентивни третман док не постану доступни резултати конкретнијих прегледа, јер је на тај начин могуће смањити стопу репликације бактерија и спречити компликације.